Wat is de functie van PBS in ELISA wasbuffer?

In het kader van uniformiteit op het lab waar ik werk wil ik uitzoeken of er één soort wasbuffer kan worden ontwikkeld voor het wassen van microtiter platen waar in ELISA word uitgevoerd.

Op dit moment zijn er twee wasbuffers in gebruik, waarvan er één Phospate-buffered saline (PBS) bevat. Ik ben zelf niet zo bekend met de werking van deze buffer of de capture antibodies in de ELISA.

Mijn blockingbuffer en exctractie/incubatiebuffer bevat ook PBS.

Weet jij het antwoord?

/2500

Het beste antwoord

PBS zorgt voor stabilisatie van je eiwitten in de oplossing. Voor een aantal eiwitten kan je nog toevoegingen erbij doen, maar PBS in toch wel de meest algemene. Als je alleen demiwater (H20 ultrapuur, milliQ, etc) gebruikt, kan dit tot deformatie van je eiwitten leiden. Om te zorgen dat je eiwitten zich toch "lekker" in de oplossing voelen, wordt PBS gebruikt. Een aantal andere mogelijkheden zijn: - Heel vaak wordt er nog een "zepige" oplossing toegevoegd. Soms wordt SDS gebruikt, maar dit is minder ideaal. Meestal wordt hiervoor Tween 20 gebruikt. - Hepes buffer, buffer alleen goed bij pH 9 a 10. Geschikt voor een beperkt aantal assays. - EDTA oplossing, gaat de caspase reactie tegen, ook weer zeer specifiek Maar 1 buffer voor alle ELISA is ambitieus. Het is goed mogelijk dat het kan, maar als je wat meer verschillende soorten hebt, moet je de hoop niet al te hoog hebben. Wasbuffer is natuurlijk wat minder kritisch en over het algemeen (even uit het hoofd) wordt er PBS + 0.05% tween hiervoor gebruikt. Ikzelf heb jaren gewerkt met ELISA's (ELISA's, biomarker assay, immunogenicity, etc) en vanuit daar een aantal praktische vragen (of dingen om rekening mee te houden) - werk je in een gevalideerd (GxP) omgeving? Gevalideerde methodes mag je niet zomaar aanpassen, ook niet wat wasbuffer betreft. Onderzoeksomgeving, veel minder een probleem. - Gebruik je het wassen ook voor na het coaten zodat je de platen na zetten in de koelkast meerdere dagen achtereen kan gebruiken (de voorraad, niet de individuele plaat)? Zo ja, moet je wel nakijken of je platen nog stabiel blijven bij langere opslag als je de wasbuffer aanpast. - de blanco's kunnen toenemen als je niet goed wast, dit kan desastreus zijn voor je assay. Het voornaamste is: vergelijken. Draai een plaat met de gewone wasbuffer en de nieuwe algemene wasbuffer. Zo zie je in de praktijk wat de effecten zijn, maar je toont ook gelijk aan of de verandering wel of geen effect heeft. Dit kan je al op 1 plaat doen volgens het checkerboard-principe. Succes (blokbuffer bevat over het algemeen BSA in PBS (gewoon hoge concentratie eiwit). Dit zorgt dat alle vrije plekken op je plaat na het coaten "bezet" zijn. Hiermee voorkom je een te hoog signaal doordat je 2nd AB aan de plaat bindt ipv aan je sample (of dat je sample aan de plaat bindt ipv aan je coating)).

Stel zelf een vraag

Ben je op zoek naar het antwoord op die ene vraag die je misschien al tijden achtervolgt?

/100